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具有保密性的材料除外）。2、目的蛋白相應一抗：請您提供質量保證的一抗（或委托我公司準備）。抗體的使用量通過預實驗后進行確認，原則上不回收使用一抗。3、陽性對照樣品（盡量提供）。4、相關文獻（可選）。注：若要檢測磷酸化蛋白，請在2-3個月內進行，因為長時間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測不到磷酸化條帶。五、提交給客戶結果1、預實驗顯色結果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預實驗采取3個一抗稀釋度，選取部分實驗樣本。2、正式實驗顯色結果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。3、完整實驗報告。六、服務項目說明1、提供的蛋白量與待檢測的目的蛋白數量有關，蛋白數量增加相應的樣品量也要增加。2、每張膜樣品數量為1-8個，不足8個以8個收取。9-16個樣品為2張膜，17-24個樣品為3張膜；以此類推。舉例：7個樣品，1個目的蛋白，算1張膜；有9個樣品，1個目的蛋白，算2張膜；7個樣品，2個目的蛋白，算2張膜，有9個樣品，2個目的蛋白，算4張膜。注：以上為一般算法。如果客戶樣品數量需要按照組別等來進行上樣時，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數。3、選擇部分樣品進行預實驗，參考目的蛋白一抗說明書進行3個稀釋度的預實驗。EdU細胞增殖檢測試劑盒應用再哪些地方？江西品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家好

免疫熒光技術服務免疫熒光技術服務（DH0014）一、服務介紹免疫熒光技術（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展*早的一種。將抗原或抗體用熒光素進行標記，標記的抗原或標記的抗體與相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術稱為免疫熒光素技術。免疫熒光細胞化學分直接法、夾心法、間接法和補體法。二、服務內容及價格服務編號服務內容服務價格服務周期（工作日）DH0014-01免疫熒光單標記檢測咨詢咨詢DH0014-02免疫熒光雙標記檢測咨詢咨詢三、客戶提供1、細胞株或細胞爬片。注：細胞爬片不宜太密；2、熒光檢測所用的抗體3、實驗前，客戶需告知具體的細胞處理方式及詳細要求。注：若有特殊處理的樣品，請盡可能出示相關材料（具有保密性的材料除外）。四、服務流程免疫熒光單標記方法免疫熒光單標記是指只標記一種蛋白質分子，方法比較簡單，只要按照染色步驟去做，通常不存在太多的問題。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否，可能會直接影響染色結果。具體染色方法如下。1、所需材料與試劑a,培養在蓋玻片或玻璃培養皿中融合程度達到60%-70%的細胞。b,一抗、FITC或TRITC標記的二抗。c。湖南哪一家EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家EdU細胞增殖檢測試劑盒可以去哪里購買？

避免反復凍融。如短時間內需多次重復使用，請于4℃避光保存，有效期半年。使用前須知該試劑是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。實驗準備1、蓋玻片2、1×PBS（）（用DEPC水配置）3、含TritonX-100的PBS（用DEPC水配置）4、甘氨酸溶液(2mg/ml)（用DEPC水配置）5、培養板或培養皿實驗參考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培養基100μl200μl300μl500μl1ml染色反應液100μl200μl300μl500μl1ml實驗步驟(以96孔板，HK2貼壁細胞為例)細胞培養取對數生長期細胞，以每孔4×103~1×105細胞接種于96孔板中，培養至正常狀態。EU標記1、將細胞完全培養基中按照500：1的比例加入EU溶液，制成2×EU標記培養基；2、提前將2×EU標記培養基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養基中，獲得1×EU溶液，其中EU的終濃度為500μM；注：1）我們不建議替換全部培養基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2）配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜；3、每孔加入300μl含EU培養基孵育細胞2小時，棄培養基。

與BrdU方法相比，EdU檢測方法無需DNA變性，無需抗原修復，無需抗原抗體反應，更簡單、更靈敏、更快速、更準確，是細胞增殖檢測的比較好選擇。更準確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完整；更簡單--無需抗原抗體反應，基于小分子化學反應的檢測方法，簡單高效，反應單需要幾分鐘；更靈敏--無需抗體，檢測染料單為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測；更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期單需2.5小時；更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。EdU細胞增殖檢測試劑盒價格。

EdU標記(a)將細胞完全培養基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養基；(b)提前將2xEdU標記培養基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養基孵育細胞2小時，棄培養基；注：1)培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態；2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留EdU細胞增殖檢測試劑盒怎樣使用？上海東寰告訴您。江蘇品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

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4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養有細胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜。抗體以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標記方法免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內兩種蛋白質分子，當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些，應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發射光不應重疊，且盡量遠離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應考慮先孵育顏色較弱的二抗。江西品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家好