慢病毒載體(Lentiviralvector)較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍,慢病毒能夠有效感ran非周期性和有絲分裂后的細胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性細胞、干細胞、受精卵以及分化的后代細胞中表達shRNA,實現(xiàn)在多種類型的細胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達的功能性沉默,為在原代的人和動物細胞組織中快速而高效地研究基因功能,以及產(chǎn)生特定基因表達降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者,不但具備特異性地使基因表達沉默的能力,而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢,為基因功能的研究提供了更強有力的工具。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞,如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等,使用慢病毒載體,能大da提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細胞基因組的幾率大da增加,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達。磷酸化特異性ELISA試劑盒專為研究信號通路中涉及的細胞內(nèi)蛋白的研究人員而設計。凝膠回收試劑盒
中喬新舟CCK-8細胞增殖/毒性檢測試劑盒(Cell Counting Kit-8)產(chǎn)品特點:1.進行高通量操作的同時大da簡化操作步驟,不需要進行移液、離心或預標記等步驟;2.通過使用試劑盒配備的stopsolution,能隨意終止顏色反應,控制實驗條件;3.避免使用放射性同位素,保證實驗安全性;4.具有很高的準確度;5.低細胞數(shù)目(小于100個細胞/孔)檢測也能保證良好的線性范圍及靈敏度;6.使用96或384孔板進行操作,節(jié)省實驗操作時間,能同時進行大量樣本檢測。
凝膠回收試劑盒驗證miRNA對靶基因的調(diào)控是否真正的存在,*常用的方法就是熒光素酶報告基因。
1996年第yi次報道其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是一個包含有11個β折疊的“桶”形結(jié)構(gòu),發(fā)色團隱藏在結(jié)構(gòu)的中心,不被水溶劑猝滅。這種緊密排列的結(jié)構(gòu)對整個GFP蛋白是很重要的,它幾乎可以完全維持熒光活性;少量的斷裂是可以平衡的,少量的點突變也是可以接受的。與當時的傳統(tǒng)熒光染料相比,GFP的主要優(yōu)勢在于它無毒,并且可以在活細胞中表達,從而能夠用于研究動態(tài)的生理過程。
幾乎就在它的序列被闡明的同時,科學家們就開始通過誘導突變來設計新的綠色熒光蛋白版本。1995年,RogerY.Tsien描述了一個S65T點突變,該突變增加了GFP的熒光強度和光穩(wěn)定性。這也使其主激發(fā)峰從395nm轉(zhuǎn)移到488nm,有效地改善了野生型蛋白的缺陷,促進了其在研究中的廣泛應用。自那以后,許多其他的突變被引入到綠色熒光蛋白中,新的熒光團迭代不斷地被設計出來。
隨著病毒生物學的發(fā)展,種類繁多的病毒載體已越來越成為向各種實驗系統(tǒng)(如細胞系、原代細胞、組織臟器等)轉(zhuǎn)運核酸的重要工具。除了在實驗室的組織培養(yǎng)和動物模型生產(chǎn)中發(fā)揮重要作用,它們還被用于zhi 療遺傳性疾病的臨床試驗中。目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒(LV)、(γ-)逆轉(zhuǎn)錄病毒(RV)、腺病毒(Ad)和腺相關病毒(AAV)。我們分述之。慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其典型特征為其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA副本,cDNA副本又能穩(wěn)定整合至宿主細胞基因組中(這就是常說的穩(wěn)轉(zhuǎn))。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種:簡單的(有時又稱為致ai病毒或γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒,如鼠白血病病毒)和復雜的(如慢病毒)。這些亞型間主要的差異在于復雜的逆轉(zhuǎn)錄病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因,而簡單的則沒有(下文有進一步的討論)。這兩類病毒顆粒都含有兩份正鏈RNA,RNA上附有病毒反轉(zhuǎn)錄酶(RT),它們位于病毒的內(nèi)核(圖1)。位于內(nèi)核的還有結(jié)構(gòu)蛋白和酶,包括核殼(NC)、衣殼(CA)、整合酶(IN)和蛋白酶(PR)。內(nèi)核由一圈外周蛋白層包圍,外周蛋白包括基質(zhì)蛋白(MA),基質(zhì)蛋白又被來源于宿主細胞細胞膜插有包膜糖蛋白的腹膜所包圍。做細胞遷移和侵襲、細胞黏附、細胞增殖、細胞毒性等實驗時,想監(jiān)測細胞變化,能看到細胞遷移的整個過程。
細胞生物學(cellbiology)是在顯微、亞顯微和分子水平三個層次上,研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能和各種生命規(guī)律的一門科學。細胞生物學由cytology發(fā)展而來,Cytology是關于細胞結(jié)構(gòu)與功能(特別是染色體)的研究。現(xiàn)代細胞生物學從顯微水平,超微水平和分子水平等不同層次研究細胞的結(jié)構(gòu)、功能及生命活動。細胞生物學是一切生命科學的*為重要的基礎學科之一。同時又是生命科學的生長點,反映了生物科學發(fā)展的*新成就。細胞生物學是以細胞為研究對象,從細胞的整體水平、亞顯微水平、分子水平等三個層次,以動態(tài)的觀點,研究細胞和細胞器的結(jié)構(gòu)和功能、細胞的生活史和各種生命活動規(guī)律的學科。細胞生物學是現(xiàn)代sheng命科學的前沿分支學科之一,主要是從細胞的不同結(jié)構(gòu)層次來研究細胞的生命活動的基本規(guī)律。從生命結(jié)構(gòu)層次看,細胞生物學位于分子生物學與發(fā)育生物學之間,同它們相互銜接,互相滲透。我們的產(chǎn)品范圍較廣,涵蓋了大量分泌型循環(huán)蛋白,如細胞因子、趨化因子和生長因子,用于免疫學和炎癥研究。凝膠回收試劑盒
ELISA試劑盒標本凝集不全時,血清中會殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽性。凝膠回收試劑盒
CCK-8試劑(Cell Counting Kit-8 細胞計數(shù)試劑 [1] )中含有WST–8:化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan),生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。該方法已被廣fan用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗**藥物篩選、細胞增殖試驗、細胞毒性試驗以及藥敏試驗等。凝膠回收試劑盒
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務:綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學實驗。