rRNA是細胞內的一種基本RNA,與r蛋白一起構成蛋白質合成的場所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來越了解,其在生物研究中也的得到了更普遍的應用,主要表現在生物進化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進化上的研究。rRNA具有高度保守性,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息。現在還可用于在細菌分類、細菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究。目前,人們已經把rRNA在進化上的普遍差異應用到了流行病學研究方面,通過對不同細菌進行鑒定分類,從而明確病因,追蹤傳染源,進一步控制及預防疾病。在細胞中,RNA種類繁多。根據結構功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。唐山RNA提取試劑進貨價
RNA指的是核糖核酸。真核生物體的遺傳物質存在于細胞核內,多數的真核生物使用DNA也就是脫氧核糖核酸來作為遺傳的中心物質,但是少量的病菌遺傳物質可以是RNA。正因為病菌的遺傳物質是RNA,所以可以通過檢測病菌的RNA是否存在,或者其濃度和含量來判斷是否存在相應的病菌傳染,傳染的程度及病菌是否仍在大量復制。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G鳥嘌呤、C胞嘧啶、U尿嘧啶,其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。RNA是核糖核酸的縮寫。存在于生物細胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。專門的高鹽緩沖系統允許RNA物質基團結合到旋轉柱的玻璃纖維基質上,同時使污染物通過柱被有效地洗去。天津RNA提取試劑推薦廠家總RNA提取試劑試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。
RNA提取試劑注意事項:1、需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。2、所有離心管,泵頭及相關溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后滅菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中,處理過夜,滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA,推薦先加入適量TRIReagent,并裂解樣品后凍存。
酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學破壁法,其方法是在一定堿濃度下,使構成細胞壁的蛋白質、脂肪及糖的化合物得到水解,從而破壞細胞壁,此法對堿的濃度及提取溫度要求比較嚴格,堿的濃度不可過濃,應控制在1%,并且對提取溫度也有一定的要求,提取時間短。因為在過分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內的酯鍵斷裂,使核糖核酸降解而影響收得率。酵母菌作為重要的模式生物,是遺傳學和分子生物學的重要研究材料。由于酵母菌的細胞壁成分復雜,且較原核生物厚,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多。如何有效地破碎細胞壁并保證RNA的完整性,是獲得高質量酵母菌總RNA的關鍵問題。總RNA的提取方法還有很多,如Trizol法、異硫氰酸胍法、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法、熱硼酸鹽法等,這些方法各有優缺點,不同的方法適用于不同類型的材料。植物RNA提取試劑產品特點:是富含多酚或淀粉的植物組織中,提取高純度的總RNA。
拭子RNA提取試劑的選擇?操作簡便性。操作簡便性也是拭子RNA提取試劑選擇的一個重要因素。操作過于復雜,不光費時費力,還容易導致樣本間的交叉污染,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測或樣本量較多情況下的檢測,操作復雜如果導致交叉污染會引起誤診,還會影響出檢測報告的時間。因而,選用操作簡便、流暢的提取試劑盒非常重要。就我們曾經用過的以上三種提取試劑盒來說,Q公司的拭子RNA提取試劑盒提取過程大約25min,從樣本處理開始需要10個步驟;T公司拭子RNA提取試劑盒整個提取過程需要1個多小時,從樣本開始處理10個步驟;B公司的Biog拭子RNA提取試劑盒提取過程大約20min,從樣本開始處理7個步驟,B公司的拭子RNA提取試劑盒在操作簡便性上具有一定優勢,更適合于較多樣本的檢測。據了解,該產品已通過藥監局備案,也更適合臨床樣本的檢測。拭子RNA提取試劑的選擇?洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高。唐山RNA提取試劑進貨價
在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶 K、溶菌酶等)。唐山RNA提取試劑進貨價
Trizol是一種總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速裂解細胞,壓制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。原理:在勻質化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機相。RNA存在于水相中。水相轉移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理:使用蛋白質變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性,經過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質,進行密度梯度超速離心,RNA沉淀于管底,而DNA與蛋白質在上清液中。使用這種方法,不但能得到高質量的RNA,而且能同時分離出細胞染色體DNA。唐山RNA提取試劑進貨價