無血清細胞凍存液的操作規范:1、培養細胞至對數生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等。選擇狀態良好的細胞進行凍存操作(注:貼壁生長細胞,用胰蛋白酶消化并用完全培養基終止消化,進行細胞計數;懸浮生長細胞,進行細胞計數)。2、500~1000g離心5min,棄上清。3、加入適量的細胞凍存液,重懸細胞,使細胞濃度達到1~10×106/ml,置于凍存管中密閉。4、采取逐級降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,-70℃過夜,置于液氮罐中長期存儲。注意:務必超凈工作臺內無菌操作,避免污染。雜交瘤細胞凍存時應定期復蘇,以檢查細胞的活性和分泌抗體的穩定性。在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細胞膜對水的通透性。南京正規無血清細胞凍存液平均價格
無血清細胞凍存液產品用途:1.無血清細胞凍存液可用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液可用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。3.無血清細胞凍存液可用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品原理:無血清細胞凍存液,含多種保護劑成分。一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量,無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內外進行雙重保護,較大提高了細胞復蘇存活率。無錫深圳無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液存儲條件:推薦將產品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。
使用方法:1)細胞超凈臺無菌環境,1.5mlEP管內加入細胞混懸劑均勻混懸細胞,細胞終濃度為5×106個/ml,混懸液體積為200μl。細胞凍存劑冰水混合物中預冷,逐滴加入細胞凍存劑800μl,細胞混懸劑與細胞凍存劑的體積比控制在1:4。2)開啟程序性降溫,降溫速率為1℃/min,較后降溫至-80℃以下進行凍存。將比較例1凍存后細胞的復蘇率與實施例5凍存后細胞的復蘇率進行對比,具體結果如附圖1所示,可見采用本發明的凍存方法能夠明顯提高細胞的復蘇率。其他實施例通過與比較例1進行比較,也得到相同的試驗結果。本發明的凍存方法不僅可以明顯提高凍存后細胞復蘇率,同時還可減少不同批次細胞凍存復蘇率不穩定、以及避免由血清中的支原體,細菌,朊細菌及其他細菌顆粒引發的污染。
細胞凍存的操作步驟:1.配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液;2.取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用PBS清洗。3.去除PBS,加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養皿表面)把單層生長的細胞消化下來;4.離心1000rpm,5min;5.去除胰蛋白酶,加入適量配制好的凍存培養液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中細胞的較終密度為5×106/ml~1×107/ml;6.將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5ml;7.在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;8.凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。無血清細胞凍存液使用方法:按照培養細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存細胞數。
無血清快速細胞凍存液凍存液成分。無血清細胞,無血清干細胞及MSC凍存液。保存條件:儲存于4℃以下。質量保障期從產品的生產日期起,為期3年。3個月以上沒有使用凍存液計劃時,盡可能冷凍保存。為避免重復凍融過程可能導致的凍存液品質下降和性能降低,推薦將100ml產品分裝小瓶后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。無血清細胞凍存液,細胞凍存與復蘇后,平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較,BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表,BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養的細胞凍存。無血清細胞凍存液產品性能:不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染。合肥正規無血清細胞凍存液廠家供應
無血清細胞凍存液使用方法:將離心管中的細胞混合液分裝于已標示完全的冷凍保存管中。南京正規無血清細胞凍存液平均價格
細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清,可以現用現配。除了這個方式,還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清,配成兩倍的儲存液,在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用,特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點:1、在使用凍存液前,需要確保細胞凍存液已經完全融化,并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環境中保存。2、使用凍存液之前應該確保凍存前的細胞生長情況比較良好,比如說細胞需要處于對數生長期,并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間,為了保證可以發揮較佳的效果,建議將細胞凍存在液氮之中,這樣可以長時間的進行保存。如果說將細胞置于-80℃的環境下保存,那么保存的時間大約為1年。南京正規無血清細胞凍存液平均價格