首先,樣品(如細胞裂解液或組織提取物)需要經過適當的處理,以確保目標蛋白的可溶性和穩定性。接下來,特異性抗體與樣品中的目標蛋白結合,形成抗原-抗體復合物。為了提高實驗的特異性和效率,通常會使用經過預處理的固相載體(如ProteinA/G瓊脂糖珠)來捕獲復合物。經過多次洗滌去除非特異性結合的蛋白后,目標蛋白可以通過改變緩沖液條件(如pH值或添加還原劑)從固相載體上洗脫下來。免疫沉淀技術的成功依賴于抗體的質量和特異性。免疫沉淀的關鍵在于選擇合適的抗體,確保其與目標蛋白的高親和力和特異性。南京Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇
在生命活動的微觀舞臺上,蛋白質絕非孤立行事,它們相互協作,構成了復雜而精密的蛋白質相互作用網絡,共同調控著細胞的各項生理功能。Co-IP 免疫沉淀(Co-Immunoprecipitation,免疫共沉淀)技術,正是科研人員用以解析這一神秘網絡的有力工具,在生命科學研究中占據著舉足輕重的地位。Co-IP 免疫沉淀的原理基于細胞內蛋白質之間天然存在的相互結合關系,以及抗原 - 抗體的特異性識別。細胞內眾多蛋白質通過結構域的相互作用形成復合物,共同執行生物學功能。廣州RIP免疫沉淀磁珠的選擇病毒研究中,免疫沉淀可分離病毒抗原,為病毒檢測技術與抗病毒藥物研發打基礎。
在生命科學的廣袤研究領域中,IP 免疫沉淀(Immunoprecipitation)宛如一把神奇的鑰匙,開啟了深入探索蛋白質相互作用和功能的大門,為科研人員揭示生命奧秘提供了強大助力。IP 免疫沉淀的基本原理基于抗原與抗體之間的高度特異性結合。抗體就像是訓練有素的 “分子”,能夠精細識別并結合目標蛋白質(抗原)。在實驗體系中,當加入針對目標蛋白的特異性抗體時,抗體與目標蛋白形成抗原 - 抗體復合物。隨后,通過添加 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠等固相載體,這些珠子表面的 Protein A/G 可以與抗體的 Fc 段緊密結合,從而將抗原 - 抗體復合物從復雜的生物樣品中分離出來,實現對目標蛋白的富集和純化。
隨后,借助偶聯了特定抗體結合蛋白(如 Protein A 或 Protein G)的固相載體,通過離心或磁分離等手段,就能將復合物從復雜的細胞裂解物中高效分離出來。與其他蛋白質分離技術相比,免疫沉淀技術具有獨特優勢。例如,相較于傳統的親和層析,免疫沉淀對低豐度蛋白的捕獲能力更強,能在復雜背景下精細富集目標蛋白。同時,它能更好地保留蛋白質的天然狀態及相互作用關系,這對于研究蛋白質復合物的組成與功能至關重要。在藥物研發領域,免疫沉淀技術發揮著關鍵作用。通過研究藥物靶點蛋白與其他蛋白的相互作用,科學家可以深入了解藥物的作用機制。合理操作 Protein A/G 免疫沉淀,能獲取高純度、高活性的目標蛋白樣品。
之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,使抗原 - 抗體復合物與珠子結合。通過離心或磁力分離,將結合有蛋白質復合物的珠子收集起來,隨后進行多次洗滌,去除未結合的雜質。洗滌過程中,洗滌液的成分和洗滌次數同樣影響著實驗結果的純度和特異性。,使用洗脫液將蛋白質復合物從珠子上洗脫下來,用于后續的分析。Co-IP 免疫沉淀在生命科學研究的多個領域發揮著關鍵作用。在信號傳導通路研究中,通過 Co-IP 免疫沉淀可以鑒定出參與同一信號通路的蛋白質,明確它們之間的上下游關系,從而構建完整的信號傳導網絡。Protein A/G 免疫沉淀,能特異性結合抗體,富集靶蛋白,是蛋白質研究常用手段。RIP免疫沉淀磁珠多少錢
免疫沉淀廣泛應用于蛋白質組學,幫助解析蛋白質功能、相互作用及修飾機制。南京Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇
免疫沉淀的基本實驗步驟包括樣品制備、抗體孵育、復合物捕獲、洗滌和洗脫。首先,樣品(如細胞裂解液或組織提取物)需要經過裂解和離心處理,以釋放目標蛋白并去除不溶性成分。接下來,特異性抗體與樣品中的目標蛋白結合,形成抗原-抗體復合物。為了捕獲復合物,通常使用與抗體Fc段結合的固相載體(如ProteinA/G瓊脂糖珠)。經過多次洗滌去除非特異性結合的蛋白后,目標蛋白可以通過改變緩沖液條件(如低pH值或添加還原劑)從固相載體上洗脫下來。南京Protein AG免疫沉淀磁珠的選擇