當細胞被裂解后,這些蛋白質復合物在一定條件下仍能保持相對穩定。我們向裂解液中加入針對某個已知蛋白(通常稱為誘餌蛋白)的特異性抗體,抗體與誘餌蛋白特異性結合形成抗原 - 抗體復合物。借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠這類固相載體,其表面的 Protein A 或 Protein G 能夠與抗體的 Fc 段緊密相連,通過離心或磁力分離,將抗原 - 抗體復合物連同與之相互作用的其他蛋白質(獵物蛋白)一同從裂解液中沉淀出來,從而實現對蛋白質復合物的富集和分析,揭示蛋白質之間的相互作用關系。免疫沉淀的關鍵在于選擇合適的抗體,確保其與目標蛋白的高親和力和特異性。廣州Co IP免疫沉淀磁珠價格
免疫沉淀技術的成功關鍵在于抗體的選擇和質量。高特異性和高親和力的抗體能夠顯著提高目標蛋白的富集效率,并減少非特異性結合的干擾。此外,實驗條件的優化(如緩沖液成分、孵育時間和溫度)也對實驗結果有重要影響。為了確保實驗的可靠性,通常會設置陰性對照(如使用非特異性抗體)以排除非特異性結合的干擾。免疫沉淀技術的應用非常。例如,在蛋白質-蛋白質相互作用研究中,免疫沉淀可以與質譜聯用(Co-IP/MS)來鑒定與目標蛋白相互作用的蛋白網絡。上海Protein AG免疫沉淀磁珠價格Protein A/G 免疫沉淀技術,利用其對抗體的親和性,分離與鑒定特定蛋白質。
例如,在研究細胞信號轉導通路時,通過免疫沉淀技術可以找出參與信號傳遞的蛋白質之間的相互作用關系,為理解細胞信號傳導機制提供關鍵線索。在蛋白質翻譯后修飾研究方面,免疫沉淀可以富集經過特定修飾(如磷酸化、乙?;龋┑牡鞍踪|,進而深入研究這些修飾對蛋白質功能的影響。在病毒學研究中,免疫沉淀可用于分離病毒蛋白及其與宿主細胞蛋白形成的復合物,有助于了解病毒機制以及宿主的免疫應答過程。免疫沉淀技術具有諸多優勢。它能夠在復雜的生物樣品中特異性地富集目標分子,顯著提高目標分子的濃度,便于后續的檢測和分析。同時,該技術可以保留生物分子之間的天然相互作用關系,為研究分子間的生理功能提供了接近真實生理狀態的樣本。
例如在研究腫瘤細胞的增殖信號通路時,科研人員可以以某個關鍵的信號蛋白為誘餌,利用 Co-IP 免疫沉淀找出與之相互作用的其他蛋白,揭示腫瘤細胞異常增殖的分子機制。在神經科學領域,Co-IP 免疫沉淀可用于研究神經元中蛋白質的相互作用,了解神經遞質釋放、突觸可塑性等過程的分子基礎。雖然 Co-IP 免疫沉淀技術有著諸多優勢,如能夠在接近生理條件下研究蛋白質相互作用,結果更具生理相關性;可以同時檢測多個蛋白質之間的相互作用,有助于發現新的蛋白質復合物。免疫沉淀在微量樣本分析中優勢凸顯,能從少量樣本里獲取足量目標分子用于研究。
之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,使抗原 - 抗體復合物與珠子結合。通過離心或磁力分離,將結合有蛋白質復合物的珠子收集起來,隨后進行多次洗滌,去除未結合的雜質。洗滌過程中,洗滌液的成分和洗滌次數同樣影響著實驗結果的純度和特異性。,使用洗脫液將蛋白質復合物從珠子上洗脫下來,用于后續的分析。Co-IP 免疫沉淀在生命科學研究的多個領域發揮著關鍵作用。在信號傳導通路研究中,通過 Co-IP 免疫沉淀可以鑒定出參與同一信號通路的蛋白質,明確它們之間的上下游關系,從而構建完整的信號傳導網絡。優化洗滌步驟可減少非特異性結合,提高免疫沉淀結果的準確性和可靠性。溫州anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠價格
Protein A/G 免疫沉淀,能特異性結合抗體,富集靶蛋白,是蛋白質研究常用手段。廣州Co IP免疫沉淀磁珠價格
實驗步驟通常包括樣品制備、抗體孵育、復合物捕獲、洗滌和洗脫。首先,樣品需要經過裂解和離心處理,以釋放目標蛋白并去除不溶性成分。接著,特異性抗體與樣品中的目標蛋白結合,形成抗原-抗體復合物。為了捕獲復合物,通常使用與抗體Fc段結合的固相載體(如ProteinA/G瓊脂糖珠)。經過多次洗滌去除非特異性結合的蛋白后,目標蛋白可以通過改變緩沖液條件(如低pH值或添加還原劑)從固相載體上洗脫下來。免疫沉淀技術的成功關鍵在于抗體的選擇和質量。廣州Co IP免疫沉淀磁珠價格