qPCR法,即定量聚合酶鏈式反應(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學技術,用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中,qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟:
1. DNA提取:首先從待測樣本中提取DNA,這可能包括細胞培養上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設計特異性引物:針對支原體的保守DNA序列,如16S rRNA基因,設計特異性的DNA引物。
3. 熒光標記探針:使用熒光標記的探針,該探針與目標DNA序列互補,能夠在PCR擴增過程中與擴增的DNA結合。
4. Ct值確定:Ct值(閾值循環數)是指在PCR反應中,熒光信號強度超過預定閾值的循環次數。Ct值越低,表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析:通過標準曲線法或相對定量法,將Ct值轉換為支原體DNA的定量結果。
qPCR法的優勢在于其高靈敏度和特異性,能夠檢測到非常低水平的支原體污染,并且可以在短時間內提供結果,這對于需要快速檢測的生物制品生產和細胞培養質量控制非常重要
細胞被支原體污染了會有什么影響?廣州細胞培養支原體檢測試劑貨期
支原體去除和支原體預防是兩種不同的策略,它們在細胞培養和生物制品生產中都非常重要。
支原體去除是指在細胞已經被支原體污染后采取的措施。這通常涉及到使用特定的抗*素或化學試劑來消滅或抑制支原體的生長。例如,根據的描述,支原體去除試劑是一種混合抗*素制劑,它含有三種對支原體具有抑菌作用的組分,可以取得良好的支原體清*效果。使用這種方法時,細胞需要在含有去除試劑的培養基中培養一段時間,然后更換培養基并檢測支原體是否已被清*。
支原體預防則是指在細胞培養過程中采取的預防措施,以避免支原體污染的發生。這包括保持實驗室環境的清潔、使用無菌技術、對所有培養基和器材進行適當的消毒處理等。根據的背景介紹,預防措施還包括對細胞培養層流柜保持整潔,避免在無蓋器皿上方舞動手掌和手臂,以及立即清理溢出物等。這些措施有助于減少支原體污染的風險。
蘇州支原體去除價格支原體及污染方式有哪些?
支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細胞培養污染,它們具有各自的特點和區別:
支原體污染:在相差顯微鏡下,支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。
黑膠蟲污染:在高倍鏡下,被黑膠蟲污染的細胞膜會變得模糊不清,邊界不清晰,有粗糙感。
污染的影響:
支原體污染:可能導致細胞增殖緩慢,甚至從培養器皿脫落,影響細胞的DNA、RNA及蛋白表達。
黑膠蟲污染:與細胞競爭性生長,開始時對細胞沒有什么影響,但當數量多時,細胞生長會受到影響直至死亡。
污染的來源:
支原體污染:可能來源于工作環境的污染、操作者本身、培養基的污染、交叉污染、實驗器材帶來的污染以及用來制備細胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染:可能來源于細胞本身的污染或從動物取材時的污染,也可能通過培養箱空氣進行污染。
細胞培養中,支原體檢測的重要性體現在以下幾個方面:
1. 高污染發生率:支原體對培養細胞的污染發生率非常高,據估計平均發生率在60%左右。
3. 隱匿性強:支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發現,除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業檢測試劑盒。
3. 影響實驗結果:支原體污染會改變細胞的生理性質,影響實驗結果的準確性。細胞培養物一旦被支原體污染,會改變細胞DNA、RNA及蛋白表達,導致實驗數據不準確、不穩定。
4. 難以通過肉眼或常規方法發現:支原體污染無法通過肉眼檢查細胞來發現,也不能通過向培養基中加入抗*素控制。
5. 對細胞培養數據可靠性的影響:支原體污染會降低細胞系的有效性,使得細胞培養數據失去可靠性,無法為生命科學研究提供有意義的數據。
6. 預防和控制污染的必要性:定期進行支原體檢測是細胞培養實驗室進行自我質量監控的必要組成部分,有助于及時發現并控制污染,保證實驗的準確性和重復性。
7. 避免細胞株受損:支原體污染可能導致細胞株受損,影響細胞株的質量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護珍貴的細胞資源
支原體檢測的樣本用什么合適?
檢測新鮮培養基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案:
1. 培養法:這是一種傳統且可靠的方法,通過將培養基接種到適宜支原體生長的微生物培養基或瓊脂平板上,觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時,但成本較低。
2. 熒光染色法:使用特定的熒光染料(如Hoechst 33258)對細胞進行染色,然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染,可以看到細胞表面或細胞間隙中支原體DNA的熒光染色。
3. PCR法:通過設計針對支原體特定序列的引物,利用PCR技術特異性擴增目標DNA。PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測,如果出現條帶則表明存在支原體污染。
4. 電鏡觀察法:使用電子顯微鏡直接觀察培養細胞中的支原體污染情況。這種方法可以提供直觀的支原體形態信息,但設備要求較高。
5. 一步法恒溫支原體檢測:使用特定的試劑盒,如Yeasen一步法恒溫支原體檢測試劑,采用等溫擴增技術,通過顏色變化(由藍紫色變為天藍色)進行快速檢測。
支原體檢測方法qPCR法?支原體檢測方法LAMP法
什么樣的客戶需要定期檢測支原體污染?廣州細胞培養支原體檢測試劑貨期
一步法支原體檢測試劑盒的防污染版本通常采用等溫擴增技術,如LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)原理,通過支原體特異性引物在恒溫條件下對樣本進行檢測,終通過顏色變化確定樣品中是否含有支原體污染。這種方法的優勢在于:
1. 快速檢測:可以在較短的時間內完成檢測,通常在60分鐘以內。
2. 高靈敏度和特異性:等溫擴增技術可以檢測到非常低濃度的支原體DNA。
3. 操作簡便:不需要復雜的設備,如PCR儀或電泳設備,只需水浴鍋即可完成擴增反應。
4. 減少污染風險:由于無需開蓋電泳,可以減少因氣溶膠造成的交叉污染。
此外,試劑盒還包含UNG(Uracil-N-Glycosylase)酶,用于防止PCR過程中的污染,UNG酶可以消化反應液中可能存在的尿嘧啶,從而減少因污染導致的假陽性結果。
廣州細胞培養支原體檢測試劑貨期