外泌體的成分

細胞外囊泡是蛋白質、mRNA、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發生分為三類，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質、脂質、細胞因子或遺傳物質。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關鍵分子。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及瘤子診療領域、醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。外泌體產生于細胞中的多泡體。外泌體的成分

內化的外泌體和內源性產生的外泌體的細胞旅程：外泌體可以通過不同的機制直接進入細胞。外泌體由細胞通過內吞作用過程從頭生成。外泌體不斷地被細胞產生和吸收。它們可能是新生成的外泌體和消耗的外泌體的混合物。目前尚不清楚內生性產生或消耗的外泌體是一起釋放還是單獨釋放。被吸收的外泌體會被溶酶體降解。進入細胞的外泌體可能進入或與已存在的ESEs融合，隨后解體并將其內容物釋放到細胞質中。另外，內泌體可以與質膜融合并在細胞外釋放外泌體。外泌體獲取外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白（包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。外泌體的提取的方式：超速離心法。

外泌體與免疫反應、病毒致病性、妊娠、心血管疾病、中樞的神經系統相關疾病和病癥進展相關。由外泌體傳遞到受體細胞的蛋白質、代謝物和核酸有效地改變了它們的生物反應。這種外泌體介導的反應可以促進或阻止疾病。外泌體在調節復雜的細胞內通路方面的固有特性使其在許多疾病的診療控制方面具有潛在的用途，主要包括神經退行性疾病和病癥。外泌體可被設計用于遞送不同的診療有效載荷，包括短干擾、反義寡核苷酸、化療藥物和免疫調節劑，并具有將其遞送到預期目標的能力。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

密度梯度離心法根據在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集，密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。外泌體的提取的方式：過濾離心。干細胞外泌體脂質組學

外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經系統是外泌體遞送藥物的一個明顯優勢。外泌體的成分

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體的成分

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