免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照,以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞,確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞,排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估,確保實驗結果的可靠性。英瀚斯生物,可做免疫組化定量分析。湖南免疫組化實驗
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細胞多的組織),需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
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(4)非特異性組分與抗體結合,這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當增加PBS沖洗次數和浸洗時間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標本染色過程中出現干片,這容易增強非特異性著色。 貴州組織免疫組化怎么選擇免疫組化公司哪家好?
免疫組化在臨床應用中,還能及時準確的發現微小轉移灶。英瀚斯生物專業做實驗外包服務,一站式醫學科研平臺。采用常規病理方法難以檢出的實體瘤轉移稱為微小轉移灶。在常規組織切片中,辨別單個或幾個轉移性cancer細胞很難,淋巴結內竇性組織細胞增生與某些cancer的早期轉移有時也不易區別,而采用免疫組化方法,有助于及時準確的發現微小(cancer)轉移灶。對乳腺cancer而言主要是腋窩淋巴結的檢測,淋巴結微轉移患者預后差,這對進一步醫療和預后判斷十分有意義。
免疫組化實驗所用的抗體
免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。
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免疫組化常用的染色方法
根據標記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標法,親和組織化學法,后者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 英瀚斯生物做免疫組化怎么樣?
在臨床應用中,免疫組化還可以進一步分類不同qi官與組織交界處cancer。由于重疊的特征,在一些組織qi官交界處的cancer,只憑組織學基礎對cancer進行分類很困難。如胃腸道梭形細胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是間質起源的胃腸道間質瘤(GIST),還是神經起源的神經鞘瘤;同樣發生于組織交界處的cancer有睪丸胚胎cancer與精原細胞cancer,兩者較難區別,且醫療與預后明顯的不同,但用免疫組化檢測角蛋白就較易于區別:角蛋白陰性則為精原細胞cancer,而角蛋白陽性則為胚胎cancer。免疫組化失敗的原因?安徽做得好的免疫組化怎么樣
常見的免疫組化方法有哪些?湖南免疫組化實驗
免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優點可以保持組織細胞的形態結構,且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態都較冰凍切片好。
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