免疫組化臨床應用對“未分化”cancer的分類。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer細胞的起源特征不能分類,初步區分組織學類型用非特異性抗體,在其基礎上再選用特異性抗體做進一步鑒定。如分化差的cancer可顯示Vimentin或S-100蛋白,有時淋巴瘤可以表達上皮膜抗原,一些黑色素瘤表現出角蛋白,這同時也強調了在cancer診斷中應使用一組抗體而不是單個抗體。如果您有實驗外包的需求,可以與我們南京英瀚斯生物進行聯系,我們也有做免疫組化的服務!英瀚斯生物免疫組化,高效高質量出結果。新疆切片免疫組化哪家好
免疫組化的DAB顯色時間如何把握?
1、DAB顯色時間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時間,到出現淺棕色本底時即可沖洗;
2、DAB顯色時間很短(如幾秒或幾十秒)就出現很深的棕褐色,這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長,需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間;
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3、此外,若很短時間就出現背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長封閉時間;
4、DAB顯色時間很長(如超過十幾分鐘)才出現陽性染色,一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短(比較好一抗4度過夜);另一方面就是封閉時間過長。 新疆切片免疫組化哪家好免疫組化樣本如何處理?
免疫組化的抗原修復技術
抗原修復是免疫組化實驗中的重要步驟,目的是暴露被固定過程掩蓋的抗原表位。常用的抗原修復方法有熱修復和酶消化。免疫組化熱修復是通過加熱(如微波或高壓)使蛋白質變性,暴露抗原表位。常用的緩沖液有檸檬酸鹽緩沖液和EDTA緩沖液。酶消化是通過蛋白酶(如胰蛋白酶)消化部分蛋白質,暴露抗原表位。免疫組化實驗中不同的抗原修復方法適用于不同的抗原和抗體,需要根據免疫組化具體實驗條件進行優化調整。
免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片?
(1)要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片,這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片,可能會破壞組織的抗原性,如果組織的抗原性較穩定,則可作石蠟切片;但是要求做石蠟切片的,可作冰凍切片。
(2)冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性,做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構,可能會使抗原彌散;切片厚度較石蠟的厚,做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時,目錄上都寫著做什么樣的切片,如果它寫著只能做冰凍,就不能做石蠟,如寫著兩者都可,那就都能做。
(3)石蠟切片的優點可以保持組織細胞的形態結構,且容易存放在室溫,而冰凍切片比較麻煩,一定要存在-80度的低溫冰箱中,尤其是用來做原位雜交的的切片,為了防止RNA降解,保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右,所以原位雜交探針容易滲透到組織中去,容易成功,而且得到的顏色/形態都較冰凍切片好。
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醫療和預后有關的免疫組化。與醫療及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高,PTEN基因表達減弱,提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫療與預后,如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價,表達指數越高,表明其增殖指數越活躍,惡性度增高,預后不良,其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發現Ki-67、EGFR陽性者,淋巴結轉移率高,并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等,應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer,如對乳腺cancer中ER、PR的檢測,有助于決定臨床醫療中是否需要加入內分泌ji素阻斷醫療,并能判斷預后,ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫療反應良好,而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。免疫組化常見問題原因分析!新疆切片免疫組化哪家好
免疫組化方法步驟是什么?新疆切片免疫組化哪家好
免疫組化結果中的假陰性是指所有抗體標記的切片均呈陰性,無陽性信號,假陰性結果不是真實的反應。導致假陰性結果的原因有:(1)抗原修復方法選擇不當,根據不同的抗原特點采用不同的修復方法,大多數抗體要求熱修復,熱修復又包括高壓修復、微波修復及煮沸熱修復;而對某些細胞內抗原和細胞間質抗原需要用酶消化,如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin則不用修復;(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效。在免疫組化中染色結果的假陰性會導致錯診或漏診,進而影響臨床診斷及延誤醫療。解決這一問題的可通過設立陽性對照,比較兩者染色結果。若陽性對照有表達,表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達,則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題,應逐一查找原因。新疆切片免疫組化哪家好