山東免疫組化實驗

免疫組化的局限性，可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性，包括著色不勻、背景著色、邊緣效應，另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗濃度及一抗是否失效，抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用，過期的抗體或者不著色，或者背景著色，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長，由于室溫的影響夏季孵育時間稍短，冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影，產生假陽性;(5)3，3'-二氨基聯苯胺(DAB)顯色時間太長，DAB宜現配現用，配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質，因此間質和胞漿中出現很多非特異性的染色，如內源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中，使壞死組織呈較高的背景染色，在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊。做好免疫組化，你需要了解這些！山東免疫組化實驗

細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

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7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

11、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 吉林切片免疫組化價格免疫組化怎么做？步驟方法？

什么是免疫組化？免疫組化的原理是什么？

1、定義：用標記的特異性抗體對組織切片或細胞標本中某些化學成分的分布和含量進行組織和細胞原位定性、定位或定量研究，這種技術稱為免疫組織化學（immunohistochemistry）技術或免疫細胞化學（immunocytochemistry）技術。

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2、原理：根據抗原抗體反應和化學顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應，前者再用標記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結合，通過呈色反應或熒光來顯示細胞或組織中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內發生的抗原抗體反應產物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。

免疫組化實驗所用的組織和細胞標本是什么樣的？

實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本**常用、**基本的方法，對于組織形態保存好，且能作連續切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中優先的組織標本制作方法。

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確定來源不明的轉移瘤的原發部位，臨床上免疫組化也可以進行操作。對于來源不明的轉移瘤，用免疫組化技術有助于確定惡性cancer的組織學來源，進一步確定原發部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫療及預后提供了依據。在南京英瀚斯做的免疫組化，效果不錯！黑龍江切片免疫組化注意事項

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免疫組化的DAB顯色時間如何把握？

1、DAB顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現淺棕色本底時即可沖洗；

2、DAB顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調抗體濃度或縮短你的抗體孵育時間；

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3、此外，若很短時間就出現背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間；

4、DAB顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（比較好一抗4度過夜）；另一方面就是封閉時間過長。 山東免疫組化實驗