1） 問題： 蛋白無法吸附到微球上。
解決方法： 加入更多的蛋白； 去除微球中的表面活性劑， 釋放其占據(jù)的蛋白結(jié)合位點； 引入
中間物， 將微球與蛋白相連； 改變緩沖液。
2） 問題： 標(biāo)記時加入了大量的蛋白， 但是仍然無活性。
解決方法： 改變蛋白加入量， 從而改變蛋白與微球結(jié)合的空間構(gòu)象； 使用表位稀釋物， 占據(jù)
微球上的部分蛋白結(jié)合位點， 防止蛋白靠的太近。
3） 問題： 清洗去除未吸附蛋白后， 微球聚集。
解決方法： 增加蛋白標(biāo)記量或封閉劑的用量， 防止有空余位點；
4） 問題： 標(biāo)記后開始活性很好， 儲存一段時間后， 活性降低。
解決方法： 降低儲存溫度到 2~8 度； 降低儲存液中的封閉劑濃度， 防止抗體被替換； 確認
儲存液中無能與抗體競爭的雜質(zhì)， 防止長時間取代抗體。 彩色微球有沒有必要買？山西原裝進口微球需要多少錢
4.
微球包被抗體后， 加入表面活性劑或者去污活性成分， 可能會導(dǎo)致抗體脫落。 如果是共價結(jié)合到微球
上， 共價結(jié)合的抗體就不會有脫落現(xiàn)象發(fā)生。 封閉蛋白， 像 BSA， casein 或 gelatin 可以用來封阻任何空余
的疏水性位點， 防止微球發(fā)生非特異性凝集。 但是表面活性劑可以將那些共價結(jié)合不牢固的抗體洗脫下來。
5.
此試劑和水反應(yīng)， 因此， 溶解后應(yīng)立刻使用掉。
6.
EDC 的用量， 根據(jù)微球表面羧基濃度來計算。根據(jù)計算所需量， 每 mol 的羧基應(yīng)該再多加 2~3mol 的 EDC。
但是， 根據(jù)功能性檢測結(jié)果， 還需要進一步的優(yōu)化。 江蘇**微球廠家彩色微球正確安裝方法，你知道嗎？
3.
離心或超濾， 用等體積的包被緩沖液清洗兩次微球， 懸浮在包被緩沖液中。 (Note 3) .
4.
用包被緩沖液溶解抗體到 1mg/mL， 包被緩沖液 pH7~9， 濃度為 50mM~100mM。 (Note 1)
5.
將抗體快速加入的攪拌中的微球懸液中， 持續(xù)攪拌， 室溫孵育 2~5 小時。 (Note 2) .
6.
每 ml 反應(yīng)溶液中加入 2. 5ul 的乙醇胺， 持續(xù)攪拌并室溫孵育 10 分鐘。 (Note 9) .
7.
離心或超濾， 用儲存緩沖液懸浮， 重復(fù)兩次， 移除未結(jié)合的抗體和乙醇胺。 (Note 3 and 4)
B2. NHS 中間活化酯兩步法
在此方法中， 在 EDAC 存在下， NHS 通過與微球上的羧基反應(yīng)形成中間活化酯。 活化酯比 EDC 更穩(wěn)定， 不易水
解。
應(yīng)用時先把針對不同檢測物的編
碼微球混合再加入微量待檢樣本在懸液中靶分子與微球表面交聯(lián)的分子進
行特異性地結(jié)合在一個反應(yīng)孔內(nèi)可以同時完成多達 100 種不同的生物學(xué)反應(yīng)。
用 Luminex?100 進行分析儀器通過兩束激光分別識別編碼微球和檢測微
球上報告分子的熒光強度。因為分子雜交或免疫反應(yīng)是在懸浮溶液中進行檢
測速度極快而且可以在一個微量液態(tài)反應(yīng)體系中同時檢測多達 100 個指標(biāo)。
流式熒光技術(shù)優(yōu)點1、高通量*需微量樣本(10μ l)1 次檢測**多 100
個指標(biāo)2、高速度**快可達 10000 測試/小時3、低成本流式熒光聯(lián)檢的
試劑用量少能有效降低臨床應(yīng)用的試劑成本4、靈敏度高檢測低限可達
10pg/ml5、重復(fù)性好每個指標(biāo)有 5000 個反應(yīng)單元分析 100 次取平均值
6、線性范圍廣檢測范圍達 6 個數(shù)量級7、無需洗滌減少誤差來源且操
作簡便、省時省力。**認證1997 年Clinical Chemistry 雜志刊登專文介
紹多功能流式點陣儀及其技術(shù)并將其譽為"真正的臨床應(yīng)用型生物芯片"。 乳膠微球的工作原理是什么？
反應(yīng)步驟：
1.
用反應(yīng)緩沖液系數(shù)蛋白到 10mg/ml；
2.
用反應(yīng)緩沖液系數(shù)膠乳微球到 1%；
3.
將蛋白溶液加入到膠乳微球溶液中， 10ml 膠乳中加入 1ml 蛋白溶液。 室溫攪拌孵育 2hr；
4.
離心或超濾， 除去未結(jié)合蛋白；
5.
將微球蛋白復(fù)合物用儲存緩沖液溶解。
注意事項：
1.
比較好蛋白標(biāo)記量影響因素
1）
有效比表面積： 粒徑減小時， 比表面積/mg 微球值得增加；
2）
膠體穩(wěn)定性： 蛋白對膠乳有穩(wěn)定和去穩(wěn)定作用；
3）
免疫反應(yīng)： **近標(biāo)記量由免疫反應(yīng)需要決定。
2.
膠乳微球中加入蛋白后， 快速攪拌混合， 利于反應(yīng)均衡。 反應(yīng)體積是 1ml 時， 可用移液器吸取蛋白加
入微球中， 并吹打數(shù)次。 如果反應(yīng)體積較大時， 用燒杯， 邊攪拌邊加入蛋白， 磁性微球正確安裝方法，你知道嗎？吉林新型微球質(zhì)量推薦
使用磁性微球時要注意些什么呢？山西原裝進口微球需要多少錢
近年來， 隨著生命科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展， 出現(xiàn)
了許多新的檢測技術(shù)， 流式熒光微球技術(shù)就是其中
的一種。 流式熒光微球技術(shù)是以熒光編碼微球作為
傳統(tǒng)免疫學(xué)測定的固相載體． 通過流式細胞儀進行
檢測分析。 該技術(shù)有機地整合了熒光微球編碼技
術(shù)、 激光技術(shù)、 應(yīng)用流體學(xué)、 先進的數(shù)字信號處理及
計算機技術(shù)． 將編碼熒光微球的特異性與流式細胞
儀的高度靈敏性相結(jié)合， 可同時測定血液或體液中
的多種可溶性蛋白及核酸． 是一個可同時獲得多重
信息的分析平臺。 該技術(shù)也可稱為液態(tài)芯片技術(shù)、
懸浮微陣列技術(shù)等。 其基本原理是利用許多不同的
微球作為主要基質(zhì)． 把不同的探針分子固定在微球
上。 然后將這些微球探針懸浮在用來檢測的液相體
系中。 通過兩束激光同時對逐一通過檢測流場的微
球探針上的分類熒光和報告分子上的標(biāo)記熒光進行檢測
山西原裝進口微球需要多少錢
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